常見問題
答:不同物種或品種的植物細胞在翻譯表達基因時,其表達模式和影響因子不同。建議實驗時盡可能選用與目的基因來源相近的受體材料進行表達。不同時間點取樣拍照,定位位置不同。活體細胞狀態(tài)下,某些蛋白有信號肽,會移動。部分蛋白在特定條件(如缺氧)下會發(fā)生亞細胞定位改變,需查閱文獻確認正常定位。GFP等標記物融合位置(N端/C端)可能改變定位結(jié)果,需根據(jù)蛋白序列調(diào)整融合策略。有些預期不符的情況可能是由?儀器分辨率限制的,低分辨率儀器可能無法區(qū)分相鄰亞細胞結(jié)構(gòu)(如內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與細胞膜);?熒光波長與儀器不匹配會導致信號檢測偏差,需更換標記物或調(diào)整儀器設(shè)置。建議優(yōu)先排查實驗操作問題,若仍無法解決則需考慮蛋白自身特性或物種差異。查閱數(shù)據(jù)庫信息或者參考文獻,明確靶蛋白的定位情況,設(shè)置空白對照。
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